什么是克隆克隆测序?

在克隆克隆测序期间,在将DNA分成准备测序的片段之前,使基因组的每种染色体的地图。

  • 在克隆克隆测序中基因组分为大块,150千面包长(150,000人基对)。
  • 这些块的位置染色体被记录(映射)以帮助在排序后按顺序组装它们。
  • 然后插入块细菌人工染色体(BACS)并放入细菌细胞中生长。
  • 块的块脱氧核糖核酸每次复制细菌除以产生许多相同的副本。
  • 个体细菌中的DNA克隆然后被分解成更小,重叠的碎片。每个片段长500个碱基对,使它们是更可管理的尺寸来排序。
  • 这些碎片被放入了一个向量具有已知的DNA序列。
  • 然后从载体的已知序列开始测序DNA片段,并延伸到DNA的未知序列中。
  • 下列的测序,DNA的小片段通过识别重叠区域来改建最初插入BAC的大块。
  • 这种“组装”由电脑进行,将DNA序列的重叠区域的斑点和块序列一起进行。
  • 然后,通过在开始时构造的地图之后,可以将大块组装回作为完整基因组序列的一部分的染色体。
  • 在20世纪80年代和1990年代使用克隆克隆方法来序列线虫蠕虫的基因组,C. Elegans.和酵母,S. Cerevisiae.
  • 克隆克隆测序是优选的方法人类基因组项目,2001年完成。

克隆克隆测序有哪些优点?

  • 从基因组的已知区域取出每种DNA片段,因此相对容易确定序列中存在任何间隙的位置。
  • 装配更可靠,因为a基因组图遵循所以科学家知道较大的碎片彼此相对的地方。
  • 由于每个片段都不同,许多人一次可以在基因组上工作。

克隆克隆测序的缺点是什么?

  • 制作克隆并产生基因组图需要很长时间。
  • 克隆克隆测序通常比其他测序方法更昂贵。
  • 染色体的一些部分,例如焦点,难以克隆。这是因为它们包含长的重复部分,这使得它们难以将和克隆到BAC中。结果,您无法使用克隆克隆排序方法进行序列。

此页面最近更新于2014-11-17